როგორ გამოითვლება დნმ-ის კონცენტრაცია სპექტროფოტომეტრის გამოყენებით?
როგორ გამოითვლება დნმ-ის კონცენტრაცია სპექტროფოტომეტრის გამოყენებით?

ვიდეო: როგორ გამოითვლება დნმ-ის კონცენტრაცია სპექტროფოტომეტრის გამოყენებით?

ვიდეო: როგორ გამოითვლება დნმ-ის კონცენტრაცია სპექტროფოტომეტრის გამოყენებით?
ვიდეო: DNA Quantitation Using a Spectrophotometer 2024, მარტი
Anonim

დნმ კონცენტრაცია არის შეაფასა შთანთქმის გაზომვა 260 ნმ-ზე, არეგულირებს A260 სიმღვრივის გაზომვა ( იზომება მიერ შთანთქმა 320 ნმ-ზე), გამრავლება მიერ განზავების ფაქტორი და გამოყენებით ურთიერთობა, რომელსაც ა260 1.0 = 50 მკგ/მლ სუფთა dsDNA.

ხალხი ასევე იკითხავს, როგორ ხვდებით დნმ-ის კონცენტრაციას და სისუფთავეს?

Შეფასება დნმ სისუფთავე გაზომეთ შთანთქმა 230 ნმ-დან 320 ნმ-მდე სხვა შესაძლო დამაბინძურებლების გამოსავლენად. ყველაზე გავრცელებული სისუფთავის გაანგარიშება არის შთანთქმის თანაფარდობა 260 ნმ-ზე გაყოფილი 280 ნმ-ზე აღქმაზე. Კარგი ხარისხის დნმ ექნება A260/ა280 თანაფარდობა 1,7–2,0.

ანალოგიურად, რა არის დნმ-ის კარგი კონცენტრაცია? ა კარგი ხარისხიანი დნმ ნიმუშს უნდა ჰქონდეს A260/ა280 თანაფარდობა 1,7-2,0 და ა260/ა230 თანაფარდობა 1,5-ზე მეტი, მაგრამ ვინაიდან სხვადასხვა ტექნიკის მგრძნობელობა ამ დამაბინძურებლების მიმართ განსხვავდება, ეს მნიშვნელობები უნდა იქნას მიღებული მხოლოდ როგორც სახელმძღვანელო თქვენი ნიმუშის სისუფთავეზე.

ამასთან დაკავშირებით, როგორ ითვლის NanoDrop დნმ-ის კონცენტრაციას?

თქვენ ამრავლებთ შთანთქმის მნიშვნელობას 260 ნმ-ზე ფიქსირებულ კოეფიციენტზე (ეს არის 50 ამისთვის დნმ ) და თქვენ მიიღებთ დნმ კონცენტრაცია . Voilá. (კარგი, ტექნიკურად ეს არის 10 მმ სისქის ნიმუშის A260, რომელიც გამრავლებულია 50-ზე; NanoDrop გამოხატავს A260-ს, თითქოს ნიმუში იყო 10 მმ სისქის, როგორც სტანდარტული კუვეტაში).

რატომ მოგვიწია სპექტროფოტომეტრის გამოყენება ჩვენი დნმ-ის რაოდენობრივად გასაზომად?

ა სპექტროფოტომეტრი არის შეუძლია დაადგინოს ნუკლეინის მჟავების საშუალო კონცენტრაცია დნმ ან ნარევში არსებული რნმ, ისევე როგორც მათი სისუფთავე. გამოყენება ლუდის-ლამბერტის კანონი არის შესაძლებელია შთანთქმის სინათლის რაოდენობის დაკავშირება შთამნთქმელი მოლეკულის კონცენტრაციასთან.

გირჩევთ: