რა ღირს ლიგაციის ტრანსფორმაცია?

2024 ავტორი: Miles Stephen | [email protected]. ბოლოს შეცვლილი: 2023-12-15 23:37

ტრანსფორმაცია . დაამატეთ 1-5 მლ ლიგირება ნარევი კომპეტენტური უჯრედებისთვის ტრანსფორმაცია . გაფართოებული ლიგირება PEG-ით იწვევს ვარდნას ტრანსფორმაცია ეფექტურობა (სწრაფი ლიგირება ნაკრები). ელექტროფორაცია რეკომენდირებულია დიდი კონსტრუქციებისთვის (>10,000 bp).

აქედან გამომდინარე, რამდენი ლიგატური პროდუქტი მჭირდება ტრანსფორმაციისთვის?

ტრანსფორმაცია . დაამატეთ 1-5 მლ ლიგირება ნარევი კომპეტენტური უჯრედებისთვის ტრანსფორმაცია . გაფართოებული ლიგირება PEG-ით იწვევს ვარდნას ტრანსფორმაცია ეფექტურობა (სწრაფი ლიგირება ნაკრები). ელექტროფორაცია რეკომენდირებულია დიდი კონსტრუქციებისთვის (>10,000 bp).

შემდგომში ჩნდება კითხვა, რა არის ლიგაცია და ტრანსფორმაცია? ტიპიური კლონირების ექსპერიმენტში მკვლევარები ჯერ დნმ-ის ნაწილს, როგორიცაა გენი, დნმ-ის წრიულ ნაწილს პლაზმიდს უწოდებენ. ეს ნაბიჯი იყენებს რესტრიქციულ ფერმენტებს და დნმ ლიგაზას და ეწოდება ა ლიგირება . Შემდეგ ლიგირება , შემდეგი ნაბიჯი არის დნმ-ის გადატანა ბაქტერიებში პროცესის ე.წ ტრანსფორმაცია.

შემდგომში შეიძლება ისიც იკითხოს, რამდენი დნმ არის საჭირო ლიგაციისთვის?

ეფექტურობისთვის ვექტორი + ჩანართის საერთო კონცენტრაცია უნდა იყოს 1-10 μg/ml ლიგირება . ვექტორი: რეკომენდირებულია მოლური თანაფარდობების ჩასმა 1:1-დან 1:10-მდე (ტიპიურია 1:3). თუ არ ხართ დარწმუნებული თქვენს დნმ კონცენტრაციებში, შეასრულეთ მრავალჯერადი ლიგირება სხვადასხვა თანაფარდობით.

რამდენ ხანს შეგიძლიათ შეინახოთ ლიგაციის რეაქცია?

ლიგატები შეიძლება უნდა გაკეთდეს ოთახის ტემპერატურაზე ან გრილზე (იფიქრეთ 12-16°C) ღამით ან თუნდაც რამდენიმე დღის განმავლობაში, თუ შენ მართლა დაკავებულია. Შენ შეგიძლია ასევე შეინახეთ ლიგირება შედგით მაცივარში და გამოიღეთ მოგვიანებით, რომ გააგრძელოთ ლიგირება ოთახის ტემპერატურაზე როგორც გრძელი საჭიროებისამებრ.